Cytométrie en Flux

Présentation

La plateforme de cytométrie en flux de l’IMRB se situe au 1^er étage du batiment Recherche de l’hôpital Henri Mondor (Plan d’accès à la plateforme).

Elle est équipée d’un trieur de cellules  (BD Influx Sorp) et de deux analyseurs (CyAn ADP LX7 et BD Fortessa X20), permettant de caractériser et d’isoler des éléments (cellules, bactéries, …) d’une suspension mono-dispersés rendus fluorescent de façon spécifique.

Les projets développés sur la plateforme sont d’origines variées mais concernent principalement la recherche en immunologie, incluant entre autre, l’étude de la fonction immune, de la résistance aux drogues, de la prolifération cellulaire, de l’apoptose et du cycle cellulaire.

Depuis mai 2011 la plateforme est certifiée ISO 9001.

Mots-Clés

• cytométrie en flux
• tri cellulaire

Compétences et Expertise

• Domaine d’expertise scientifique et technique: biologie cellulaire, immunologie
• Compétences et savoir-faire : Analyse et tri cellulaire par cytométrie

Matériels disponibles

La plateforme gère et assure la maintenance et le contrôle qualité des instruments suivants.

• Trieur : Influx (BD Biosciences)
  4 lasers (488, 640, 405 et 561nm)
  2 paramètres de morphologie (taille et granulosité),
  18 paramètres de fluorescence :
  Laser 488nm : 520/15, 530/40, 670/30 et 710/50.
  Laser 640nm : 670/30, 720/40 et 750LP.
  Laser 405nm : 460/50, 520/35, 610/20, 660/20, 710/50 et 750LP.
  Laser 561nm : 585/29, 610/20, 670/30, 710/50 et 750LP.
  Détecteur microparticules (<0,2µm).
  70 000 évènements par seconde.
  Jusqu’à 6 voies de tri, 4 types de buses (70, 86, 100 et 140µm).
  Température contrôlée (de 5°C à 95°C),
  Récupération dans des microtubes, des tubes à hémolyse ou des tubes falcon de 15 et 50 mL. Option de clonage sur plaques de culture (6/24/48/96/384 puits) ou lame de microscope.

• Analyseur : LSR Fortessa X20 (BD Biosciences)
  3 lasers (405, 488 et 640nm)
  2 paramètres de morphologie (taille et granulosité),
  14 paramètres de fluorescence
  Pour le laser 488nm : 530/30, 575/26, 610/20, 695/40 et 780/60.
  Pour le laser 640nm : 670/14, 730/45 et 780/60.
  Pour le laser 405nm : 450/50, 525/50, 610/20, 670/30, 710/50 et 780/60.
  20 000 évènements par seconde.

• Analyseur : Cyan ADP LX7 (Beckman Coulter)
  2 lasers (488 et 640nm)
  2 paramètres de morphologie (taille et granulosité),
  7 paramètres de fluorescence
  Pour le laser 488nm : 530/40, 575/25, 613/20, 680/30 et 780LP.
  Pour le laser 640nm : 665/20, 750LP.
  70 000 évènements par seconde.

• Postes d’analyse Flow-Jo (Mac et PC)

Services proposés

• Tris cellulaires.
• Analyse de cytométrie en flux.
• Formations à l’acquisition, à l’analyse et à l’interprétation des résultats obtenus.
• Mise à disposition des cytomètres après validation de la formation.
• Analyse de données (logiciel Flow-Jo).
• Conseils aux utilisateurs.

Conditions d’Utilisation

La plateforme est ouverte à toutes les équipes de l’IMRB et aux équipes extérieures (des secteurs public et privé) qui en feraient la demande. Les équipes désirant travailler avec cette plateforme doivent d’abord rencontrer les responsables techniques pour présenter leur projet et établir un planning prévisionnel d’utilisation.

Horaires d’ouverture

Du lundi au vendredi de 8h30 à 17h. Réservations par mail à l’adresse suivante : cytometrie.imrb@inserm.fr. En dehors de ces horaires, il est possible de planifier des rendez-vous en accord et en fonction des disponibilités du personnel de la plateforme.

Contact

Adeline Henry ou Aurélie Guguin

IMRB, INSERM U955

Plateforme de Cytométrie en Flux

Hôpital Henri Mondor, Bâtiment Recherche

1er étage, porte AA-064 et AA-061

51, ave du Maréchal de Lattre de Tassigny 94010 Créteil

Tél: 01 49 81 36 03

Mail : cytometrie.imrb@inserm.fr

Exemples de prestations réalisées

Figure représentative d’une analyse de lymphocytes T régulateur (Treg) humains du sang périphérique (sextuple marquage)

Depuis le 9 mai 2011, la plateforme de cytométrie en flux est certifiée ISO 9001 ce qui facilite son ouverture à des partenaires industriels. Sa certification a été renouvelée en avril 2014.

La norme ISO 9001 définit une série d’exigences concernant la mise en place d’un système de management de la qualité dans un organisme, quels que soient sa taille et son secteur d’activité.